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Sobre a detecção de ácido nucleico, quanto você sabe?
Desde o surto de COVID-19, o teste de ácido nucleico tornou-se uma palavra de alta frequência. Um teste de ácido nucleico positivo é um critério importante para o diagnóstico de COVID-19. WST-8 tornou-se a API para kits de teste de ácido nucleico. Quanto você sabe sobre testes de ácido nucléico? Qual é o princípio da detecção de ácido nucleico? Por que os testes de ácido nucleico apresentam falsos negativos? Além dos testes de ácido nucleico, que outras tecnologias podem detectar o novo coronavírus?
Desmistificando o princípio da detecção de ácido nucleico do novo coronavírus
O teste de ácido nucleico serve, na verdade, para detectar se existe ácido nucleico (RNA) do novo coronavírus no corpo da cobaia. O ácido nucleico de cada vírus contém ribonucleotídeos, e o número e a ordem dos ribonucleotídeos contidos em diferentes vírus são diferentes, tornando cada vírus específico.
O ácido nucleico do novo coronavírus também é único, e a detecção de ácido nucleico é a detecção específica do ácido nucleico do novo coronavírus. Antes do teste de ácido nucleico, é necessário coletar amostras de escarro do sujeito, esfregaço de garganta, líquido de lavagem broncoalveolar, sangue, etc., e ao testar essas amostras, pode-se descobrir que o trato respiratório do sujeito está infectado com bactérias. A detecção de ácido nucleico do novo coronavírus é comumente usada para detecção de amostras de esfregaço de garganta. A amostra é dividida e purificada, e dela é extraído o possível ácido nucleico do novo coronavírus, e os preparativos para o teste estão prontos.
A detecção de ácido nucleico de novo coronavírus usa principalmente tecnologia RT-PCR quantitativa de fluorescência, que é uma combinação de tecnologia PCR quantitativa de fluorescência e tecnologia RT-PCR. No processo de detecção, a tecnologia RT-PCR é utilizada para transcrever reversamente o ácido nucleico (RNA) do novo coronavírus no ácido desoxirribonucléico (DNA) correspondente; então a tecnologia de PCR quantitativo de fluorescência é usada para replicar o DNA obtido em grandes quantidades. O DNA replicado é detectado e marcado com uma sonda sexual. Se houver um novo ácido nucleico do coronavírus, o instrumento pode detectar o sinal fluorescente e, à medida que o DNA continua a replicar, o sinal fluorescente continua a aumentar, detectando assim indiretamente a presença do novo coronavírus.
Por que ocorrem falsos negativos?
Um falso negativo significa que a pessoa testada foi infectada pelo novo coronavírus, mas o ácido nucleico do vírus não foi detectado, ou seja, o teste de ácido nucleico é negativo. Se um sujeito não apresentar sintomas relevantes e o teste de ácido nucleico for negativo, é fácil deixá-lo relaxar a vigilância, o que pode levar a uma propagação mais ampla do vírus, que é também a astúcia do novo coronavírus.
Existem três razões principais para falsos negativos:
Primeiro, o conteúdo de ácido nucleico do novo coronavírus na amostra de teste original é demasiado baixo, abaixo do limite inferior de detecção. Isto está relacionado ao tipo de amostra coletada e ao momento da coleta.
Em segundo lugar, se o local onde o ácido nucleico do novo coronavírus se liga à sonda sofrer mutação, isso poderá afetar a eficiência de ligação da sonda na detecção, resultando no sinal fluorescente indetectável.
Terceiro, os falsos negativos também estão relacionados à sensibilidade da tecnologia de detecção. Na fase inicial do surto, os kits clínicos não estavam suficientemente maduros e a sua sensibilidade não era suficientemente elevada, e houve relatos frequentes de falsos negativos. Mais tarde, com a melhoria do nível técnico, a taxa de precisão de detecção aumentou rapidamente e a taxa de falsos negativos continuou a diminuir.
Um teste de ácido nucleico positivo é um diagnóstico?
Um resultado positivo no teste de ácido nucleico pode confirmar a presença de ácido nucleico viral no trato respiratório superior do sujeito, mas não pode ser diagnosticado diretamente como um paciente com nova pneumonia coronária. No caso de um teste de ácido nucleico positivo, o sujeito deve ser diagnosticado posteriormente com base na história epidemiológica. O histórico de contato, etc., pode ser diagnosticado como um caso confirmado.
Se o sujeito não apresentar sintomas relevantes, geralmente é diagnosticado como uma infecção assintomática. As infecções assintomáticas também são contagiosas, e algumas infecções assintomáticas posteriormente começaram a apresentar sintomas e se tornaram pacientes confirmados.
Outras tecnologias para detectar o novo coronavírus
Para os sujeitos, o isolamento do vírus da amostra é a base mais confiável para o diagnóstico. No entanto, o isolamento do vírus é uma operação relativamente perigosa, que necessita de ser realizada num laboratório com um elevado nível de protecção, e é demorada e dispendiosa. . As instituições médicas gerais não apresentam essa condição. A maioria deles usará o método de detecção se existem anticorpos virais no sangue para determinar se o sujeito está infectado com o vírus. Hepatite B, AIDS, etc. são todos testados desta forma.
O novo coronavírus também pode ser detectado por este método de detecção imunológica. Diante da invasão do novo coronavírus, o corpo humano irá “resistir” e produzir anticorpos específicos IgM e IgG (imunoglobulina M e imunoglobulina G). Se esses dois anticorpos específicos forem detectados no sangue da cobaia, isso pode indicar que a cobaia está infectada com o novo coronavírus.
Como detectar anticorpos? O método comumente utilizado é o imunoensaio de quimioluminescência, ou seja, o uso de reagentes de quimioluminescência ou enzimas específicas para marcar anticorpos ou antígenos, a formação de complexos por reação imunológica e, em seguida, a adição de reagentes de luminescência após a lavagem. Anticorpos específicos da espécie, o instrumento de quimioluminescência pode detectar o sinal luminescente. Este imunoensaio de quimioluminescência é uma das técnicas de imunoensaio mais avançadas atualmente. Possui alta sensibilidade, forte especificidade, ampla faixa de detecção e resultados rápidos, mas o custo de detecção é alto.
Além disso, como leva um certo tempo para o corpo humano produzir anticorpos após ser infectado pelo vírus, ele só pode ser detectado após a produção dos anticorpos, o que também leva à pouca oportunidade de detecção de anticorpos. Demora 2 a 3 semanas após uma infecção, como hepatite B e AIDS, para produzir anticorpos. Demora mais de 3 dias para detectar anticorpos IgM e mais de uma semana para detectar anticorpos IgG após a infecção pelo novo coronavírus.
Portanto, para capturar a cauda do novo coronavírus o mais rápido possível, é utilizada mais detecção de ácido nucleico, que pode detectar os vestígios do novo coronavírus mais cedo.
